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琥珀酰亚胺酯SE(Succinimidyl esters) = N-羟基琥珀酰亚胺NHS(N-Hydroxy succinimide)
菁染料Cy3和Cy5已成为基因芯片的首选荧光标记物;另外,Cy5, Cy5.5和Cy7的吸收在近红外区背景非常低,是荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。
3.1 水溶性SulfoCy3 NHS标记anti-GST多克隆抗体
市场上买到的抗体如果含有其它蛋白(例如serum albumin或gelatin等)或带氨基的缓冲液会影响标记,在标记前需纯化。
1. 在1 L 0.15 M NaCl 溶液中透析anti-GST抗体(浓度为0.5 mL at 3 mg/mL),常温透析4小时。
2. 在4°C用新鲜的1 L 0.15 M NaCl 溶液再透析过夜。
3. 第二天用1 L 0.1 M NaHCO3(pH 8.3)透析4小时。
5. 用0.1 M NaHCO3稀释少量的抗体,在280nm处测其紫外吸收值计算标记抗体的总量(IgG antibody摩尔吸光系数170 000 M-1cm-1at 280 nm).
7. 用1 L 0.15 M NaCl 溶液常温避光透析4小时除去未标记上的Cy3。
8. 在4°C用新鲜的1 L 0.15 M NaCl 溶液再避光透析过夜。
9. 用1 L of 0.01 M PBS/ 0.01% 叠氮化钠溶液常温避光透析4小时, 在4°C常温避光再次透析过夜。
11. 用0.01 M PBS/0.01 % 叠氮化钠整数倍稀释标记抗体溶液,测量280nm(蛋白)和552nm(Cy)处的紫外可见吸光度。
12. 产品冷冻干燥成粉末或在0.01 M PBS/ 0.01% 叠氮化钠溶液中,-20℃避光储存。
[antibody] = {A280- (0.08×A552)}/170000
F/P final= [Cy3]/[antibody]= {1.13×A552}/ {A280- (0.08×A552)}
Name | SulfoCy3 SE | ||
---|---|---|---|
CAT# | 1051-1 mg | CAS# | |
Storage# | −20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure | Shelf Life# | 12months |
Ex(nm)# | 548 | Em(nm)# | 562 |
MW# | 765.95 | Solvent# | Water or DMSO |
Name | SulfoCy3 SE |
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CAT# | 1051-1 mg |
CAS# | |
Storage# | −20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure |
Shelf Life# | 12months |
Ex(nm)# | 548 |
Em(nm)# | 562 |
MW# | 765.95 |
Solvent# | Water or DMSO |