抗体荧光标记试剂及标记服务
Cy5 SE
商品编号: 1054-1 mg
2450元/1mg/瓶
产品介绍

1. 产品简介

      菁染料是性能优良的荧光标记染料,摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的,其琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂,广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度可改变其荧光发射波长,每增加一个双键,按照Huoffman规则正好红移约100nm

菁染料Cy3Cy5已成为基因芯片的首选荧光标记物;另外,Cy5, Cy5.5Cy7的吸收在近红外区背景非常低,是荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。


屏幕快照 2020-01-29 09.54.47.png

2. 菁染料琥珀酰亚胺酯(CyDye NHS)的标记

菁染料和生物分子的比例F/P=412之间荧光强度最高,F/P值过高荧光探针会自我淬灭并影响生物分子的生物活性,标记生物分子最好是用单琥珀酰亚胺酯,但是用双修饰的CyDye NHS并没有发现交联。CyDye NHS标记抗体在pH (8.59.4)10分钟F/P可达56,而在pH 7.0几乎不反应。我们用不同比例的Cy3标记anti-glutathione-S-transferase (GST)多克隆抗体发现用1:1, 5:1, 10:1 20:1标记时得到的F/P值分别是0.28:1, 1.16:1, 2.3:1 4.6:1


3. 操作步骤

3.1 水溶性Cy5 NHS标记(D-ser2)-leucine­enkephalin 

1.    Cy5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μL DMSO后,加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate (YSGFLT, 0.75 mg) 400 μL DMSO溶液。(Dye peptide 投料比是1:1

2.    然后加入15 μL三乙胺,常温避光搅拌反应混合物过夜。

3.    HPLC纯化蛋白,使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm),每次上样注入2×400 μL30分钟梯度洗脱从0.1% TFA水溶液到MeCNH2O0.1% TFA=7030,流速4mL /min。(对不同的蛋白选择不同的合适HPLC梯度流动相)

4.    收集适当的色带峰,标记多肽的保留时间比未标记的多肽长。

5.    产品冷冻干燥成粉末或在水溶液中,-20避光储存;必要时可用质谱表征。

6CyDye标记的蛋白稳定性取决于蛋白本身。例如标记的IgG可避光保存2月;更长期的保存需加入等体积的甘油-20 避光保存。

F/P计算:

Cy5 650 nm 的摩尔吸光系数为250 000 M-1cm-1,所用蛋白在280 nm处的摩尔吸光系数为170 000 M-1cm-1Cy5280nm处的吸收是650nm处的5%。按以下公式计算F/P值。

 [Cy5 dye] = (A650)/250 000

 [peptide] =[A280-(0.05×A650)]/170 000

F/P final= [dye]/[peptide]= {0.68×A650}/ {A280- (0.05×A650)}




产品参数
Name Cy5 SE
CAT# 1054-1 mg CAS# N/A
Storage# −20°C干燥避光保存 Shelf Life# 12months
Ex(nm)# 646 Em(nm)# 664
MW# 791.99 Solvent# Water or DMSO
Name Cy5 SE
CAT# 1054-1 mg
CAS# N/A
Storage# −20°C干燥避光保存
Shelf Life# 12months
Ex(nm)# 646
Em(nm)# 664
MW# 791.99
Solvent# Water or DMSO
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400-686-3443