Super Fluor 488,555, 647, 680, 750 SE活化酯标记抗体
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1.产品简介
Super Fluor 系列(~Alexa Fluor 系列)荧光探针,具有更强的荧光强度,更广的pH应用范围(pH 4~10), 更好的抗淬灭性。在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。
表 Super Fluor 488,555, 647, 680, 750活化酯的性质参数
488 | 555 | 647 | 680 | 750 | |
活化酯分子量 | ~900 | ~1250 | ~1300 | ~1150 | ~1300 |
最大吸收波长(nm) | 494 | 555 | 647 | 680 | 750 |
摩尔吸光系数(M-1cm-1) | 71 000 | 150 000 | 239 000 | 184000 | 240 000 |
最大发射波长(nm) | 524 | 565 | 665 | 702 | 775 |
A280nm /Amax | 11% | 8% | 3% | 5% | 4% |
2. Super Fluor 标记抗体的参考方案:
1) 蛋白溶解:用0.1 M NaHCO3溶解至终浓度为2mg/mL
将1ml 去离子水加入84mgNaHCO3瓶中,配成1M 的碳酸氢钠溶液。振荡或吹打至完全溶解。该溶液pH 约8.3,2~6℃保存可用2 星期;若抗体是溶液,将抗体稀释至2mg/mL,再加入1/10 体积的上述碳酸氢钠溶液;若抗体是冻干粉,将1M 碳酸氢钠溶液用10 倍去离子水稀释成0.1M 后,用其将抗体溶成2mg/mL的溶液;
2)染料溶解:活化Super Flour SE染料固体粉末从冰箱放入干燥器中慢慢升至常温后,用无水DMSO将染料配置浓度为1 mg/mL。
3)标记:在1mL蛋白溶液中缓慢加入适量染料溶液,(蛋白:染料摩尔比=1:20~50;质量比可在以下范围内优化10~200ug Super Flour SE 每毫克IgG抗体)。同时在暗处常温缓慢搅拌1小时。也可以直接将蛋白溶液直接加入染料的固体粉末的试剂瓶中,同时在暗处常温缓慢搅拌1小时。
4)纯化:用透析法或者葡聚糖Sephadex纯化产品后,产品冷冻干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM叠氮化钠溶液中,-20℃避光储存。
5)贮存:标记好的蛋白贮存于2~6℃,避光。若纯化的蛋白偶联物浓度小于1mg/mL,加入BSA 或其他稳定蛋白1~10mg/ml。在2mM 叠氮钠存在的情况下,2~6 度可保存几个月。保存更长时间,则需分装后-20℃保存。避免反复冻融,避光保存。
3.计算标记比例F/P值:
对于IgG 等大多数抗体来说,摩尔吸光系数为203000,F/P值在4~9 之间是最合适。
Super Flour 647标记蛋白F/P值计算:
1)用PBS 精确倍数稀释定量的少许纯化过的偶联蛋白,在1cm比色皿中测定280nm和650nm的光吸收;
2)计算样品中的蛋白浓度:蛋白摩尔浓度=(A280-(A650×0.03))×稀释倍数/203000
3)计算标记比例:每摩尔蛋白结合的染料摩尔数=A650×稀释倍数/(239000×蛋白摩尔浓度)
4. 活性染料稳定性与储存:
请注意:未开封的粉末在避光干燥-20℃可存放6月。其水溶液现配现用不能储存。任何溶解后的染料最好立即使用;无水的DMSO溶液-20°C保存最多2个星期。
特别提醒:
1) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅。
2) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!
Name | Super Fluor 647 | ||
---|---|---|---|
CAT# | 1009-5mg | CAS# | N/A |
Storage# | -20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure | Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | 651 | Em(nm)# | 668 |
MW# | N/A | Solvent# |
Name | Super Fluor 647 |
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CAT# | 1009-5mg |
CAS# | N/A |
Storage# | -20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure |
Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | 651 |
Em(nm)# | 668 |
MW# | N/A |
Solvent# |