详细说明书
技术资料Super Green qPCR mix (~Sybr Green qPCR mix）(None/Low/High ROX & Universal)
产品储存： -20 ℃ 避光保存12个月，使用前充分溶解混匀。Mix 融解后可在 4℃避光条件下稳定存放一个月，尽量避免反复冻融。
1. 注意事项： 所有产品仅限用于研发，必须生物技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！
1) 本制品不含参比染料ROX，客户可根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
2) 本制品含Super Green I 强光下易分解，降低灵敏度，使用时避免长时间强光照射本制品。
3) 建议在冰上配制PCR反应液，再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性，减少背景。
4) 使用前上下颠倒轻轻混匀 Mix，请勿涡旋振荡混匀，避免产生过多气泡。
5) 推荐的引物终浓度为 0.2μM，可在 0.1~1μM 范围内优化。
2. 实验优化 若使用默认反应条件反应性能不佳时，则需要进行反应条件的优化，可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行：
① 引物浓度调整：当引物终浓度在0.1~1.0μM范围之间变化时，引物浓度越低, 扩增特异性越高，但扩增效率会有所下降。
② 扩增程序优化：需提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度；需提高扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间。
a) 扩增产物长度建议控制在 80~200 bp；引物长度为 18~25 bp；
b) 正向引物和反向引物的 Tm 值相差不超过 1℃为佳，Tm值控制在58~62℃为佳；
c) 引物的 GC 含量控制在 40%~60% 之间；引物 3' 端最后一个碱基最好为 G 或者 C；
d) 引物 A、G、C、T 整体分布尽量要均匀，避开 T/C 或者 A/G 的连续结构（特别是 3' 端）；
4. 建议PCR反应体系（以50μL反应体系为例，反应液配制请在冰上进行）
5. qPCR 反应程序（可根据机型适当调整）
b. 不同qPCR 仪的熔解曲线采集程序有差别，一般可使用仪器默认的熔解曲线采集程序。
Eppendorf Mastercycler® ep realplex 系列； | |||
一分般析在 35 循环以后空白对照出现扩增产物属正常情况，应配合熔解曲线进行重新设计引物，调整引物浓度或优化 PCR 反应程序 | ||
提污取染后，的或设RN计A跨溶内液含使子用引D物NA 酶进行消化，例如：dsDNase，以去除基因组使用精准的移液器、配合高品质吸头准确移液 | ||
| Name | Super Green qPCR mix (~Sybr Green qPCR mix，None/Low/High ROX & Universal) | ||
|---|---|---|---|
| CAT# | 021-50T; 021-200T | CAS# | N/A |
| Storage# | -20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing | Shelf Life# | 24 months |
| Ex(nm)# | 497 | Em(nm)# | 525 |
| MW# | N/A | Solvent# | N/A |
| Name | Super Green qPCR mix (~Sybr Green qPCR mix，None/Low/High ROX & Universal) |
|---|---|
| CAT# | 021-50T; 021-200T |
| CAS# | N/A |
| Storage# | -20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing |
| Shelf Life# | 24 months |
| Ex(nm)# | 497 |
| Em(nm)# | 525 |
| MW# | N/A |
| Solvent# | N/A |
