Qubit定量检测DNA浓度的荧光试剂
PicoGreen dsDNA 定量检测试剂盒
商品编号: 015-2000T; 015-(200Tx10)
3950元/kit/2000T; 4150元/kit/200Tx10
产品介绍

dsDNA 定量检测PicoGreen荧光染料

 

1.应用说明

    在分子生物学的试验过程中,PicoGreen dsDNA 定量试剂盒是荧光检测双链 DNA 并进行定量 的一种产品,这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术中的:cDNA 文库的构建;用于亚克隆的  DNA 片段纯化及应用,比如进行 DNA 定量、产物扩增和引物的进一步检测。 疫苗是现代疾病预防中常用的控制方式。如今许多疫苗是细胞培养疫苗,比如重组乙肝疫苗、狂犬病疫苗等大多数疫苗都采用细胞培养的方法生产。其中,疫苗的纯化是关键问题,我们需要尽可能的去除宿主细胞DNA和宿主蛋白。假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。

   常规的DNA含量的检测方法是在260nmA260)处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大,并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰,无法区分DNARNA,而且这种方法不灵敏(5μg/mLdsDNA溶液A260=0.1)。PicoGreen定量检测方法简单、方便,被多家生物制品厂所选择,成为生物制品残留DNA检测的标准。

目前该方法已纳入2010年版《中国药典》

原理:

 PicoGreenDNA双链结合后才发出的荧光,无DNA不发荧光;所发荧光与DNA浓度成正比。在2010年《中国药典》中提出,PicoGreen定量DNA的方法检出限约0.3ng/mlDNA含量在1.25-80ng/mL范围时线性较好(R2>0.99).

优点:

1)该方法可以测定来源于任何表达宿主样品中的双链DNA

 2)可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA

 3)远远超出传统紫外A260的检测方法和Hoechst33258的灵敏度。

 4)较高浓度的盐,尿素,乙醇,氯仿,去垢剂,蛋白或琼脂糖对测定无影响。

5)在等摩尔浓度 ssDNA RNA 存在的条件下测定 dsDNA,其影响很小。

 

2.所需器材

微型荧光计;便携式荧光仪-上海互帼科学仪器有限公司HG-9型;1cm石英比色皿

• PicoGreen dsDNA 定量检测试剂盒, 1mL 单位量的试剂浓缩液足够 2mL 体积的 200 次测定。

1×TE10mM Tris 1mM EDTApH8.0 250ug/mL Sigma 小牛胸腺DNA

 

3.实验方案

  试剂制备

PicoGreen dsDNA 定量试剂是以 1mL 的浓缩液形式保存在无水的 DMSO(二甲基亚砜)中。实 验当天,配制 2XPicoGreen 试剂的操作溶液,用 1xTE 1:200 的比例稀释浓缩液(10mM Tris-HCl

1mM EDTApH7.5)。如果要准备足够的操作溶液测定 20 个样品,可在 20mL1x TE 中加入 100μL PicoGreen dsDNA 定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。PicoGreen 试剂 见光易降解,所以应将配好的溶液用箔包住或放置暗处避光保存。

溶液最好在配制好数小时内使用,以保证最佳结果。

实验方法:

1). 标准品工作液的配制:

 Sigama小牛胸腺嘧啶DNA干粉(货号:D4522-1MG1mgTrisNacl等浓度已成标准体系),加入1mL双蒸水,配制成1mg∕mL的标准品工作液;

2). 染料工作液的配置:

6 uLPicoGreen加入1mL TE(注意:用1×TEPicoGreen稀释200倍,现用现配,注意避光)

3). 标准品工作液稀释:

1)母液稀释:取10ul1mg∕mL)标准品工作液加入到990ul TE溶液中,浓度稀释成10ug∕mL,取10ul10ug∕mL)标准品工作液加入到990ul TE溶液中,浓度稀释成100ng∕mL

2)倍比稀释:取800ul 100ng∕mL)的标准品工作液加入到200ul TE溶液中,浓度达到80ng∕mL(药典规定:荧光染色方法DNA含量在1.25-80 ng/mL范围线性较好, 该法DNA检出限为0.3 ng/ml),取500ul80ng∕mL)的标准品工作液加入到500ul TE溶液中,浓度稀释到40ng∕mL;依次倍比稀释,配成20ng/ml10ng/ml5.0ng/ml2.5ng/ml1.25ng/ml0.625ng/ml的标准品溶液;

        picogreen.jpg4).标准曲线的制备:倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100ul混匀,避光室温放置5min。使用FB-15型便携式荧光仪检测样品的荧光值:将混合后的溶液加入微量比色皿,确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微量检测皿的外部,可以驱散气泡。以1×TE缓冲液为blank,测定样品和空白对照的荧光值;用标准品溶液的浓度(ng/ml)对应的荧光强度作直线回归,制备标准曲线。

 

待测DNA最终浓度

(ng/ml)

荧光读值

100

6210

50

3195

40

2507

20

1261

10

620.8

5

298

4

258.8

2

152

0.5

43.8

0

0.72

 

5). 测量剩余样品的荧光值。荧光计将给出一个直接的浓度读数,数据可以用来产生DNA 浓度的标准曲线。

 

4 参考文献

1)       Nucleic Acids Res. 24, 2623 (1996)

2)       BioTechniques 21, 372 (1996)

3)       BioTechniques 21, 664 (1996)

4)   Proc. Natl. Acad. Sci. USA 936091 (1996)

5)       Anal. Biochem. 102, 344 (1980)

6)       Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, J. Sambrook, E.F. Fritsch and T. Maniatis, Cold Spring Harbor Lab Press, Cold Spring Harbor, New York,1989


产品参数
Name PicoGreen dsDNA 定量检测试剂盒
CAT# 015-2000T; 015-(200Tx10) CAS# N/A
Storage# 4°C干燥避光 Shelf Life# 12个月
Ex(nm)# 488 Em(nm)# 520
MW# N/A Solvent# DMSO
Name PicoGreen dsDNA 定量检测试剂盒
CAT# 015-2000T; 015-(200Tx10)
CAS# N/A
Storage# 4°C干燥避光
Shelf Life# 12个月
Ex(nm)# 488
Em(nm)# 520
MW# N/A
Solvent# DMSO
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官方微信

400-686-3443