本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,则必须把组织消化成单细胞状态,才可以进行检测。
本试剂盒足够检测50个样品,每个样品的细胞数量可以为10-100万。
1)本试剂盒需要使用流式细胞仪进行检测。需自备PBS和70%乙醇。
3)为防止不同批次细胞在实验时所处周期不同导致重复性差,可以在实验前进行细胞的同步化处理。实验细胞应处于对数生长期,贴壁细胞一般在50~80%汇合度时收集为宜。
4)400目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉,留下单细胞,否则会出现人为的多倍体干扰。如果没有条件过滤,请在染色之前将细胞轻弹以分散,再进行染色。
5)荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
6)碘化丙啶对人体有刺激性,操作碘化丙啶时,应注意防护,保护眼睛、避免吸入。
1. 细胞样品的准备:细胞数量控制在1×105~1 × 106个。
细胞沉淀用1 mL预冷的70%乙醇轻轻混匀,4℃固定2 h以上或者过夜。然后1000 g左右离心5 min沉淀细胞后,小心吸除上清,可以残留约50微升左右的70%乙醇,以避免吸走细胞。
加入1 mL预冷的PBS重悬。然后再次1000g离心5 min沉淀细胞。小心吸除上清,可以残留约50微升左右的PBS,以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
对于1个样品,在0.5 mL染色缓冲液中加入25uL 碘化丙啶储液和10uL RNase A溶液,混匀待用。其它数量的样品参考下表,根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液:
注:配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以4℃保存,宜当日使用。
4. 染色:
每管细胞样品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液,轻轻混匀重悬细胞沉淀,37℃避光孵育30分钟,就可以进行流式检测,流式检测最好在5h内完成。
用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
Name | 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒 | ||
---|---|---|---|
CAT# | C1052 | CAS# | |
Storage# | -20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing | Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | Em(nm)# | ||
MW# | Solvent# |
Name | 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒 |
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CAT# | C1052 |
CAS# | |
Storage# | -20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing |
Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | |
Em(nm)# | |
MW# | |
Solvent# |