Annexin V-Super Fluor 647/PI 细胞凋亡检测试剂盒
微量移液器;PBS; 不含EDTA的胰酶消化液; 低速离心机; 流式细胞仪
1) 所有产品仅限用于研发,必须生物技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!
3) Propidium Iodide(PI)有毒,操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触。
4) Annexin V-Super Fluor 647中含有剧毒成分叠氮化钠(NaN3), 操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触。
5) 本试剂盒用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量1x105~1x106。
6) 染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
8) 消化贴壁细胞残留的胰酶会消化并降解Annexin V-Super Fluor 647,最终导致染色失败。
1) 收集细胞至离心管中1000-2000rpm离心5min,小心去除上清。
2) 用1ml 4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。
3) 再加入1ml 4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。
1)吸出细胞培养液至离心管中,PBS洗涤贴壁细胞一次,加入适量不含EDTA的胰酶细胞消化液消化细胞。
2)室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化。
3)加入步骤i中收集的细胞培养液,稍混匀,转移到离心管内,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。
4)用1ml 4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。
5)再加入1ml 4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。
2. 用去离子水按1:4稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去离子水);
3. 用250ul结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1×106/ml;
4. 取100ul的细胞悬液于5 ml流式管中,加入Annexin V- Super Fluor 647,轻轻混匀;
7. 上机前在反应管中补加400ml PBS重悬细胞, 避光保存, 随即进行流式细胞仪(FACS)检测, Annexin V- Alexa Fluor 647和PI均为红色荧光。
图2. 流式细胞仪检测早期凋亡细胞。在双变量流式细胞仪的散点图上,左下象限显示活细胞,右下象限为早期凋亡细胞,右上象限是凋亡晚期细胞和坏死细胞。
1) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅!
2) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!
Name | Annexin V-Super Fluor 647/PI 细胞凋亡检测试剂盒 | ||
---|---|---|---|
CAT# | 2022 | CAS# | |
Storage# | -20 °C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing | Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | 647 | Em(nm)# | 668 |
MW# | Solvent# | DMSO |
Name | Annexin V-Super Fluor 647/PI 细胞凋亡检测试剂盒 |
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CAT# | 2022 |
CAS# | |
Storage# | -20 °C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing |
Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | 647 |
Em(nm)# | 668 |
MW# | |
Solvent# | DMSO |