Annexin V-Super Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒
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微量移液器;PBS; 不含EDTA的胰酶消化液; 低速离心机; 流式细胞仪
3) Propidium Iodide(PI)有毒,操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触。
4) Annexin V-Super Fluor 488中含有剧毒成分叠氮化钠(NaN3), 操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触。
5) 本试剂盒用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量1x105~1x106。。
6) 染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
8) 消化贴壁细胞残留的胰酶会消化并降解Annexin V-Alexa Fluor 488,最终导致染色失败。
1) 收集细胞至离心管中1000-2000rpm离心5min,小心去除上清。
2) 用1ml 4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。
3) 再加入1ml 4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。
1)吸出细胞培养液至离心管中,PBS洗涤贴壁细胞一次,加入适量不含EDTA的胰酶细胞消化液消化细胞。
2)室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化。
3)加入步骤i中收集的细胞培养液,稍混匀,转移到离心管内,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。
4)用1ml 4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。
5)再加入1ml 4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。
2. 用去离子水按1:4稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去离子水);
3. 用250ml结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1×106/ml;
4. 取100ul的细胞悬液于5 ml流式管中,加入Annexin V- Alexa Fluor 488,轻轻混匀;
7. 上机前在反应管中补加400ml PBS重悬细胞, 避光保存, 随即进行流式细胞仪(FACS)检测, Annexin V- Super Fluor 488和PI均为红色荧光。
Name | Annexin V-Super Fluor 488/Dead Cell Apoptosis Detection Kit | ||
---|---|---|---|
CAT# | 2010 | CAS# | |
Storage# | -20 °C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing! | Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | 488 | Em(nm)# | 520 |
MW# | Solvent# | DMSO |
Name | Annexin V-Super Fluor 488/Dead Cell Apoptosis Detection Kit |
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CAT# | 2010 |
CAS# | |
Storage# | -20 °C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing! |
Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | 488 |
Em(nm)# | 520 |
MW# | |
Solvent# | DMSO |