* Omega滤光器由Omega公司提供(www. omegafilters.com);Chroma滤光器由Chroma公司提供(www. chroma.com)。
**DiR的发射波长肉眼不可见,所以需要配备CCD镜头或其他的近红外检测仪器。
1. DiD,DiO,DiI,DiR和DiS细胞膜染色液制备
(1)配置DMSO或EtOH 储存液:储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1~5 mM。
(2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,配制浓度为1~5 µM的工作液。
注意:工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。
(2)在37 ℃培养细胞 2~20分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。
(2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)在37 ℃培养细胞 2~20分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。
(5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,培养5~10分钟,然后吸干培养基。
(1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
a) DiI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004;
b) DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007;
c) DiI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005
DiD,DiO,DiI,DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1,FL2,FL3和FL4流式细胞仪检测。
Name | DiI perchlorate | ||
---|---|---|---|
CAT# | 22102-10mg | CAS# | 41085-99-8 |
Storage# | −20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure | Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | 549 | Em(nm)# | 565 |
MW# | 933.87 | Solvent# | DMSO |
Name | DiI perchlorate |
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CAT# | 22102-10mg |
CAS# | 41085-99-8 |
Storage# | −20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure |
Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | 549 |
Em(nm)# | 565 |
MW# | 933.87 |
Solvent# | DMSO |