本试剂盒本底低,灵敏度高,线性范围宽,使用方便。本试剂盒可以测定1000个样品1000T(96 孔板)。
注意事项: 本公司所有产品仅限用于研发,操作时必须戴口罩/手套/实验服和其它生化实验室防护措施。
1. 探针装载后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
4. 活性氧阳性对照(Rosup) 仅仅用于作为阳性对照的样品,并不是在每个样品中都需加入活性氧阳性对照。
5. 探针装载完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的装载情况是否良好。DCF的激发光谱和发射光谱请参考上图。
6. 尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外),以减少各种可能的误差。
7. 本公司所有产品仅限用于研发,操作时必须戴口罩/手套/实验服和其它生化实验室防护措施。
8. 定量的话要作标准曲线吧。先做一个不同浓度H2O2氧化DCFA荧光值,做一条标准曲线,X轴为H2O2浓度,y轴是荧光值,得出一个方程,在看你样品的荧光值即Y值是多少,对应的X值就是。
a) 细胞准备:检测前一天进行细胞铺板,确保检测时细胞数量小于5×105/ml。
b) 药物诱导:去除细胞培养液,加入无血清培养基稀释的药物处理,于37℃细胞培养箱内避光孵育,实际诱导时间由药物特性和细胞类型决定。
d) ROS 探针准备:探针装载前按照1:1000 用无血清培养液稀释DCFH-DA,使其终浓度为10 μM。
f) 细胞清洗:用无血清培养液洗涤细胞1~2 次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。
a) 细胞准备:按照标准方法培养细胞,必须保证检测用细胞状态。按照适当方法,清洗并收集足量的细胞。
b) 药物诱导:将收集好的细胞悬浮于适量稀释好的药物,于37℃细胞培养箱内避光孵育,实际诱导时间由药物特性和细胞类型决定。
d) ROS 探针准备:探针装载前,按照1:1000 用无血清培养液稀释DCFH-DA,使其终浓度为10 μM。
e) 探针装载:除去细胞内药物,离心收集细胞,加入稀释好的探针,使其细胞密度为1×106 ~ 2×107。
注意:细胞密度需根据后续的检测体系,检测方法,以及检测总量来进行调整。例如:对于流式分析,单管检测内细胞数目不少于104,也不可多于106。
f) 细胞清洗:用无血清细胞培养液洗涤细胞1-2 次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。
a) 对贴壁生长细胞或活组织,可直接在荧光显微镜下观察;对悬浮生长细胞,取25-50 μL 细胞悬液滴到一张显微载玻片上,再盖上一张盖玻片。
b) 荧光显微镜下,选用FITC 滤光片观察荧光,去除背景观察荧光的变化。
a) 对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞。用0.5-1 mL PBS 重悬细胞(0.5~1 x 105/ml)。
b) 选择流式细胞仪FL1 或BL1 通道,488nm 激发,测定530nm 的发射,细胞应可分成两个亚群:ROS 阴性细胞仅有很低的荧光强度,ROS 阳性细胞有较强的绿色荧光。
使用488nm激发波长,525nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF的荧光光谱和FITC非常相似,可以用FITC的参数设置检测DCF。DCF的激发光谱和发射光谱参考下图。
使用活性氧检测试剂盒(Reactive oxygen species assay kit)显示CHO细胞内活性氧荧光。
左图:CHO细胞用试剂盒配备的活性氧阳性对照处理;右图:正常CHO细胞。绿色荧光表明细胞活性氧急剧增加,并能显示其定位。
Name | ROS 活性氧检测试剂盒 | ||
---|---|---|---|
CAT# | 040-1000T | CAS# | N/A |
Storage# | −20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing | Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | N/A | Em(nm)# | N/A |
MW# | N/A | Solvent# |
Name | ROS 活性氧检测试剂盒 |
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CAT# | 040-1000T |
CAS# | N/A |
Storage# | −20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing |
Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | N/A |
Em(nm)# | N/A |
MW# | N/A |
Solvent# |