Lipo3K Transfection Reagent
1) 卓越的转染效率—针对较难转染细胞,可将效率提升2~10倍
使用方法: (每次转染一定要进行预实验,来摸索最佳条件, 尤其是转染试剂的最佳用量!)
对大多数细胞来说,转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平,并能减少细胞毒性。
2.按照下表使用Opti-MEM培养基稀释Lipo3K-B试剂(建议同时用2管),充分混匀
3. 使用Opti-MEM培养基稀释DNA,制备DNA预混液,然后添加Lipo3K-A 试剂,充分混匀。
4. 在每管已稀释的Lipo3K-B试剂中加入稀释的DNA (1:1比例)。
转染siRNA至细胞中时,遵循如上所述的DNA实验方案,但在稀释siRNA时不要加入Lipo3K-A试剂(第3步)。
细胞转染注意事项: 细胞/DNA/siRNA每次都不同,建议每次转染一定要进行预实验来摸索最佳条件,尤其是转染试剂的最佳用量!
2) 细胞的种类和状态影响较大:转染时细胞必须处于良好生长状态,转染时细胞的密度一般铺板率在达到70—80%最好(此时细胞处于对数生长期);
5) 转染时注意脂质体和用量,过量的话对细胞毒性大也容易失败。
8) 转染试剂对个别细胞可能有一定毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养答基中添加抗生素。
10) 培养基中的血清:在开始准备DNA和转染试剂稀释液时要使用无血清的培养基,因为血清会影响复合物的形成。其实,只要在DNA-转染试剂复合物形成时不含血清,在转染过程中是可以使用血清的。
11) 培养基中的抗生素:抗生素是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒,但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性,导致转染效率降低。
12) 一般在转染24-48h,靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的,24-48h后即可进行靶基因表达的检测实验。
13) 如若建立稳定的细胞系,则可对靶细胞进行筛选,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物,常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素和新霉素等。
Name | Lipo3K转染试剂 | ||
---|---|---|---|
CAT# | 030 | CAS# | N/A |
Storage# | 4°C Sealed&desiccated&Minimized light exposure | Shelf Life# | 18 months |
Ex(nm)# | N/A | Em(nm)# | N/A |
MW# | N/A | Solvent# | N/A |
Name | Lipo3K转染试剂 |
---|---|
CAT# | 030 |
CAS# | N/A |
Storage# | 4°C Sealed&desiccated&Minimized light exposure |
Shelf Life# | 18 months |
Ex(nm)# | N/A |
Em(nm)# | N/A |
MW# | N/A |
Solvent# | N/A |