PEI Transfection Reagent 转染试剂 (高效低毒)
产品简介:
线性化聚乙烯亚胺 PEI转染试剂是一种高电荷阳离子聚合物,非常容易结合带负电荷的核酸分子,形成复合物, 并使该复合物进入细胞中。该转染试剂是一种瞬时转染试剂,细胞毒性低,转染效率高,在 293 和 CHO 等细胞中基因表达效率较高。目前已经验证线性 PEI 转染试剂广泛适用于多种细胞系包括 293、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 Hela 细胞等。该试剂与含血清的培养基兼容,能高效的将核酸导入细胞。
产品储存: -20℃保存两年。(4 °C保存有效期1年,不可重新冻存!)
使用方法: DNA的转染 以 6 孔板为例
1. 接种细胞:为了提高转染效率,建议在转染前一天接种细胞,以转染时细胞密度在 70%~80%为宜。
2. 准备 DNA-PEI 复合物:按照以下体系配制 DNA-PEI 核酸-转染试剂复合物:
1) 对于每孔细胞,使用 100 μL 无血清培养基稀释 2 μg 目的DNA ,充分混匀成 DNA 稀释液。
【注】:无血清稀释液建议采用 Opti-MEM 或ddH2O
2) 立刻向 100 μL 的 DNA 稀释液中加入 5 μL 的PEI转染试剂,旋涡 10 秒,充分混匀。
3) 在室温下孵育 10~25 min,使得形成 DNA-PEI 阳离子核酸转染试剂复合物。
3. 转染细胞:
1) 在形成复合物过程中,移除细胞生长培养基,每孔中加入 2 mL 新鲜预热的完全培养基。
2) 直接将 100 μL DNA-PEI 核酸-PEI 复合物加入细胞中,摇动培养板,轻轻混匀。
3)37 ℃,5% CO2 培养箱培养,转染后最快 7 h 即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。
4. 稳转筛选(可选)
转染 24 h 后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释 10 倍以上),37 ℃,5% CO2 培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
不同细胞培养容器转染用量(仅供参考):
培养皿 | 表面积(cm2) | DNA 的量(μg) | 转染试剂的量(μL) | 稀释液体积(μL) | 培养基总量 |
96 孔板 | 0.3 | 0.1 | 0.1 | 10 | 100 μL |
48 孔板 | 0.7 | 0.2 | 0.3 | 20 | 200 μL |
24 孔板 | 1.9 | 0.5 | 1 | 50 | 500 μL |
12 孔板 | 3.8 | 1 | 2 | 50 | 1mL |
6 孔板 | 10 | 2 | 4 | 100 | 2 mL |
25cm2 培养瓶 | 21 | 4 | 8 | 200 | 4 mL |
75cm2 培养瓶 | 58 | 10 | 20 | 500 | 10 mL |
注意事项
1) 配置好的 PEI 溶液从-20 ºC 拿出融化后,可放在 4 ºC 冰箱保存,绝不可重新冻存。
2) 对大多数细胞每1μg DNA用3.0 μL PEI 转染试剂。也可以1μg DNA 使用 1.5~4 μL PEI 转染试剂进行优化。
3) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅。
4) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!
Name | PEI转染试剂 (高效低毒) | ||
---|---|---|---|
CAT# | CAS# | ||
Storage# | 4°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing! | Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | Em(nm)# | ||
MW# | Solvent# |
Name | PEI转染试剂 (高效低毒) |
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CAT# | |
CAS# | |
Storage# | 4°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing! |
Shelf Life# | 24 months |
Ex(nm)# | |
Em(nm)# | |
MW# | |
Solvent# |