Western Blot-ECL特超敏发光液
ECL Plus
商品编号: 044-100mL; 044-500mL
500元/套(50mL+50mL); 2000元/套(250mL+250mL)
产品介绍

ECL Plus 化学发光底物 说明书

 

保存:室温运输,收到后在4避光下储存试剂

 

一. 产品描述:

   ECL Plus超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。由于采用了富百科独有的核心专利技术基于“乒乓”机理设计的发光底物系统。可通HRP实现低皮克级的免疫印迹检测,其灵敏度,发光时间和背景均明显优于T公司和M公司

(1)    可使用更高的抗体稀释倍数(1:20001:10000),极其节省抗体。

(2)    简单易用 可替代其它公司的ECL发光底物,操作步骤无需进行特别优化

(3)    灵敏度更高 可检测低皮克级的蛋白

(4)    信号持续时间更长 光信号持续时间长达5小时

(5)    更多成像方法 适用于X射线胶片、CCD或激光成像仪

(6)    价格更经济 相比其他品牌的类似产品,不仅具有高品质和高性能,同时价格也更低

二. 用途:用于HRP标记抗体的Western BlotHRP标记探针的核酸杂交。

三. 使用方法:

1. 执行常规SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。

操作概述

 注:优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度,以保证阳性结果。

1)  将一抗浓度稀释到0.05~1ug/ml

2) 将二抗浓度稀释到0.005~0.04ug/mL

3) 将两种底物组份按1:1比例混合,制备底物工作液。

注:暴漏于日光或任何其他强光可能损害工作液,为获得最佳结果,将此工作液保存在琥珀色瓶中,并避免长期暴漏于任何强光。短时间暴漏于实验室常规照明不会损害该工作液。

4) 将印迹膜在ECL底物工作液中孵育5分钟。

5) 吸出多余试剂。用清洁的塑料膜盖住该印迹膜。

6)  使印迹膜在X光胶片上曝光。

2. Western Blot最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液:分别取等体积的溶液AB,放入干净容器中混合。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

3. 用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(0.125mL发光工作液/cm2膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育3分钟,准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。

4. 用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。

5. 打开X光胶片暗盒,在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。

6. 暗房内压X光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。           

四. 储存:4 oC密封避光保存一年以上。短期可放置室温。

五. 安全性:无特殊毒性,按普通化学品处理。

六. 注意事项:

1)步骤15可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。

2)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。

3)发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。

(4)由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000~1:4000,二抗1:2000~1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。

(5)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。

(6)使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。

(7)NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。

产品参数
Name ECL Plus
CAT# 044-100mL; 044-500mL CAS# N/A
Storage# 4°C干燥避光 Shelf Life# 12个月
Ex(nm)# N/A Em(nm)# N/A
MW# N/A Solvent# N/A
Name ECL Plus
CAT# 044-100mL; 044-500mL
CAS# N/A
Storage# 4°C干燥避光
Shelf Life# 12个月
Ex(nm)# N/A
Em(nm)# N/A
MW# N/A
Solvent# N/A
官方微信

400-686-3443