不致突变/超灵敏核酸电泳染料
Sybr Green I 核酸染料(10,000× DMSO溶液)(电泳级)
商品编号: 001-100uL
580元/支/100μL
产品介绍

Super Green I(同Sybr Green)核酸染料

本品用 DMSO 溶解,因为 DMSO 溶点是 18.3℃,使用前请放置到室温充分溶解。

Super Green I  核酸染料特点:

1.    无毒性:花菁染料,无致癌毒性。

2.    高灵敏:紫外凝胶透射仪下灵敏度高 EB 染色法 5-10 倍,可见光透射仪下的灵敏度比 EB 染色法高20~30 倍。

3.    信噪比高:样品荧光信号强,无背景信号。

4.    操作简单:无须脱色或冲洗,即可用紫外凝胶透射仪观察或可见光透射仪观察。

5.    适用范围广:可适用于多种电泳分析,如琼脂糖凝胶电泳和 PAGE 凝胶电泳。

6.    使用方便:不影响其它修饰酶作用(如:Taq 酶、内切酶、T4 连接酶、反转录酶等)。

Super Green I  核酸染料使用方法:

1.胶染法(用法同EB)(推荐方法,见图1)

1)   制胶时加入 Super Green I  核酸染料。冷却胶到 50℃左右,每 100ml 胶中加入1-3µl Sybr Green I 核酸染料(见图 1)。

2)   按照常规方法进行电泳即可。

3)   用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃, 观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。

*注:此方法染色能准确确定片段分子量且用量较少。1ml 染料可以做 1000 块10 ml 胶,每块胶点 50 个样,可做 50000 次。

2.点染法(见图3) 

1)   该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。

2)   工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的Super Green I 稀释100倍,即为Super Green I 工作液。Super Green I 工作液可以置2~8℃保存一个月以上, 浓缩液在-20℃保存半年。

3)   制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。

4)   样品染色:向分析样品中加入Super Green I工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使Super Green I与样品中DNA充分结合。Super Green I 工作液加入量为总上样量的1/5~1/10。

5)   DNA Marker染色:将5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀释液和1μLSuper Green I 工作液混匀,室温放置5分钟,使Super Green I 与DNA充分结合。

6)   上样、电泳:按常规操作。用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃, 观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。

*注:用点染法染色时,灵敏度最高,染料用量最少。通常点一个样加入 1µL 即 可,可以使用 10000 次, 但大片段稍有滞后现象,如果需要更准确确定分子量(与Marker 对比),建议使用胶染法。

3.泡染法

1)   按照常规方法进行制胶,其中不含任何染料。

2)   用 pH 7.0 - 8.5  的缓冲液(如:TAE, TBE),按照 1﹕1000 的比例稀释 Sybr Green I

3)   核酸染料,混匀,制成染色溶液。

4)   将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。 室温振荡染色 10-30 分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直 接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆 盖整个胶板,并染色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料 吸附在玻璃表面上)。

5)   用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃, 观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。

*注:用泡染方法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中用量最大的。

 

几种染色方法特点比较:

            染色方法              特点

灵敏度

染料用量

确定片段分子量精

胶染法

较高

较少

较高

点染法

很高

最少

大片段稍有滞后

泡染法

较高

最多

最高

点染+染法

最高

较多

大片段稍有滞后

 

Super Green I  核酸染料使用注意事项:

1.    Super Green核酸染料样品点染方法中,电泳不要超过 2 小时,以免核酸染料从 DNA/RNA 上分离出来,产生弥散状条带。

2.    用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(和 Marker 对比),建议用胶染法和泡染法。

3.    常规用酒精沉淀核酸过程中,Super Green I  核酸染料可以全部从核酸上去掉。

4.    DNA电泳请选择 Sybr Green I 染料,RNA 电泳请选择 Sybr Green II染料,两种染料不通用。

5.    Super Green I 核酸染料对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染 色等使用过程中用聚丙烯类容器。

6.    可以加Orange Red 作为标记. pH值在7.5-8.3之间,不要微波加热,加入热胶的温度低于50度

          Super Green I  核酸染料不同使用方法电泳图谱:

       sybrgreen.jpg                      sybrgreen-2.jpg

                           EB     Super Green I DNA Stain                                                    EB     Super Green I

  Fig.1胶染法Fig.1 DNA marker 2000 10, 5, 2.5 per lane             Fig.2胶染+点染 Fig.2 DNA Marker 2000 incubate at RT for 3~5min

            sybrgreen-3.jpg                               sybrgreen-4.jpg

                  EB    Super Green I DNA Stain                                                            EB      Super Green II RNA Stain

 Fig3. 点染法Fig.3 Volume ration of Dye/DNA marker 2000               Fig.4 Incubate at RT for 3~5min then load 0.5,1,1ug  per lane

=1:10 incubate at RT for 3~5min then load 5,2,1uL per lane.             Fig4. Sybr Green II点染(RNA)

产品参数
Name Sybr Green I 核酸染料(10,000× DMSO溶液)(电泳级)
CAT# 001-100uL CAS# N/A
Storage# 4°C干燥避光保存 Shelf Life# 12个月
Ex(nm)# 497 Em(nm)# 525
MW# N/A Solvent# DMSO
Name Sybr Green I 核酸染料(10,000× DMSO溶液)(电泳级)
CAT# 001-100uL
CAS# N/A
Storage# 4°C干燥避光保存
Shelf Life# 12个月
Ex(nm)# 497
Em(nm)# 525
MW# N/A
Solvent# DMSO
官方微信

400-686-3443