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LipoCy5Me SE

菁染料是性能优良的荧光标记染料,摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的。

菁染料琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂,广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。

通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长,每增加一个双键,按照Huoffman规则正好红移约100nm。

菁染料Cy3和Cy5已成为基因芯片的首选荧光标记物.

Cy5, Cy5.5和Cy7的吸收在近红外区背景非常低,特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。
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产品编号
LipoCy5Me SE-1mg/2450元
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产品描述
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脂溶性LipoCy®5Me SE

SulfoCy®和LipoCy®为北京富百科生物技术有限公司注册商标,未经授权严禁使用!

Cy®5 SE=Cy5 NHS=Cy5琥珀酰亚胺酯
(琥珀酰亚胺酯SE(Succinimidyl esters) = N-羟基琥珀酰亚胺NHS(N-Hydroxy succinimide)

   菁染料是性能优良的荧光标记染料,摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的,其琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂,广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长,每增加一个双键,按照Huoffman规则正好红移约100nm。

菁染料Cy3和Cy5已成为基因芯片的首选荧光标记物;另外,Cy5, Cy5.5和Cy7的吸收在近红外区背景非常低,是荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。

2. 菁染料琥珀酰亚胺酯(LipoCy NHS)的标记

 

菁染料和生物分子的比例F/P=4~12之间荧光强度最高,F/P值过高荧光探针会自我淬灭并影响生物分子的生物活性,标记生物分子最好是用单琥珀酰亚胺酯,但是用双修饰的CyDye NHS并没有发现交联。CyDye NHS标记抗体在pH (8.5~9.4)时10分钟F/P可达5~6,而在pH 7.0几乎不反应。我们用不同比例的Cy3标记IgG抗体发现用1:1, 5:1, 10:1 和20:1标记时得到的F/P值分别是0.28:1, 1.16:1, 2.3:1 和4.6:1。

 

3. 操作步骤

3.1 脂溶性LipoCy5 NHS标记IgG

1. LipoCy5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μL 无水DMSO(无水DMSO推荐使用SigmaAldrich货号276855)后,加入到1mL 的玻璃瓶中盛有IgG ( 0.75 mg) 的400μL DMSO溶液。(Dye 和peptide 投料比是1:1)

2. 然后加入15 μL三乙胺,常温避光搅拌反应混合物过夜。

3.用HPLC纯化蛋白,使用蛋白C18柱子(25cm×10 mm),每次上样注入2×400 μL,30分钟梯度洗脱从0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O(0.1% TFA)=70∶30,流速4mL/min。(对不同的蛋白选择不同的合适HPLC梯度流动相)

4.收集适当的色带峰,标记多肽的保留时间比未标记的多肽长。

5.产品冷冻干燥成粉末或在水溶液中,-20℃避光储存;必要时可用质谱表征。

6. LipoCy标记的蛋白稳定性取决于蛋白本身。例如标记的IgG在4 ℃可避光保存2月;更长期的保存需加入等体积的甘油-20 ℃避光保存。

F/P计算:

对于MW=150,000的典型IgG在280nm处的摩尔消光系数(ε)约为210,000M-1cm-1

对于MW=66,400的BSA在280nm处的摩尔消光系数约为43,824M-1cm-1

LipoCy5 在650 nm 的摩尔吸光系数为250 000 M-1cm-1,所用蛋白在280 nm处的摩尔吸光系数为210 000 M-1cm-1;Cy5在280nm处的吸收是650nm处的5%。按以下公式计算F/P值。

 [LipoCy5 dye] = (A650)/250 000

 

 [peptide] =[A280-(0.05×A650)]/210 000

F/P final= [LipoCy dye]/[peptide]= {0.84×A650}/ {A280- (0.05×A650)}

 

特别提醒:

1) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅。

2) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!

 

产品参数

Name 脂溶性LipoCy®5Me SE
CAT# LipoCy5Me SE-1mg/2450元 CAS# N/A
Storage# −20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure Shelf Life# 12months
Ex(nm)# 646 Em(nm)# 664
MW# 616.20 Solvent# Water or DMSO
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