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LipoCy3 Me SE

菁染料是性能优良的荧光标记染料,摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的。

菁染料琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂,广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。

通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长,每增加一个双键,按照Huoffman规则正好红移约100nm。
菁染料Cy3和Cy5已成为基因芯片的首选荧光标记物.
Cy5, Cy5.5和Cy7的吸收在近红外区背景非常低,特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。
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产品编号
LipoCy3 Me SE-1mg/2450元
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产品描述
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脂溶性LipoCy®Me3 SE

SulfoCy®和LipoCy®为北京富百科生物技术有限公司注册商标,未经授权严禁使用!

琥珀酰亚胺酯SE(Succinimidyl esters) = N-羟基琥珀酰亚胺NHS(N-Hydroxy succinimide)

1. 产品简介

      菁染料是性能优良的荧光标记染料,摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的,其琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂,广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长,每增加一个双键,按照Huoffman规则正好红移约100nm。

菁染料Cy3和Cy5已成为基因芯片的首选荧光标记物;另外,Cy5, Cy5.5和Cy7的吸收在近红外区背景非常低,是荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。

2. 菁染料琥珀酰亚胺酯(LipoCy NHS)的标记

菁染料和生物分子的比例F/P=4~12之间荧光强度最高,F/P值过高荧光探针会自我淬灭并影响生物分子的生物活性,标记生物分子最好是用单琥珀酰亚胺酯,但是用双修饰的LipoCy  NHS并没有发现交联。LipoCy  NHS标记抗体在pH (8.5~9.4)时10分钟F/P可达5~6,而在pH 7.0几乎不反应。我们用不同比例的Cy3标记多克隆抗体发现用1:1, 5:1, 10:1 和20:1标记时得到的F/P值分别是0.28:1, 1.16:1, 2.3:1 和4.6:1。

 

3. 操作步骤

3.1 脂溶性LipoCy3 NHS标记IgG

   市场上买到的抗体如果含有其它蛋白(例如serum albumin或gelatin等)或带氨基的缓冲液会影响标记,在标记前需纯化。

1. 在1 L 0.15 M NaCl 溶液中透析抗体(浓度为0.5 mL at 3 mg/mL),常温透析4小时。

2. 在4°C用新鲜的1 L 0.15 M NaCl 溶液再透析过夜。

3. 第二天用1 L 0.1 M NaHCO3(pH 8.3)透析4小时。

4. 用0.22 μm注射器过滤头过滤抗体溶液。

5. 用0.1 M NaHCO3稀释少量的抗体,在280nm处测其紫外吸收值计算标记抗体的总量(IgG antibody摩尔吸光系数210 000 M-1cm-1at 280 nm). 

6. 用无水DMSO配置LipoCy3 NHS (MW 765.95)溶液浓度为10 mg/mL;计算所需体积以得到想要的LipoCy NHS 和抗体的比值(例如20:1),然后慢慢将其加入到抗体溶液中,同时在暗处常温缓慢搅拌45分钟。(无水DMSO推荐使用SigmaAldrich货号276855)

7. 用1 L 0.15 M NaCl 溶液常温避光透析4小时除去未标记上的LipoCy3。

8. 在4°C用新鲜的1 L 0.15 M NaCl 溶液再避光透析过夜。

9. 用1 L of 0.01 M PBS/ 0.01% 叠氮化钠溶液常温避光透析4小时, 在4°C常温避光再次透析过夜。

10. 用0.22 μm注射器过滤头过滤抗体溶液。

11. 用0.01 M PBS/0.01 % 叠氮化钠整数倍稀释标记抗体溶液,测量280nm(蛋白)和552nm(LipoCy)处的紫外可见吸光度。

12. 产品冷冻干燥成粉末或在0.01 M PBS/ 0.01% 叠氮化钠溶液中,-20℃避光储存。

 

F/P计算:

对于MW=150,000的典型IgG在280nm处的摩尔消光系数(ε)约为210,000M-1cm-1

对于MW=66,400的BSA在280nm处的摩尔消光系数约为43,824M-1cm-1

脂溶性LipoCy3在552nm摩尔吸光系数为150 000 M-1cm-1;此蛋白在280nm的摩尔吸光系数为170 000 M-1cm-1;不同蛋白的摩尔吸光系数不一样;LipoCy3 染料本身在280 nm 的吸收是552nm处的8%。按以下公式计算F/P值。

[LipoCy3] = A552/150000

[antibody] = {A280- (0.08×A552)}/210000 

F/P final= [LipoCy3]/[antibody]= {1.4×A552}/ {A280- (0.08×A552)}

 

特别提醒:

1) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅。

2) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!

 

产品参数

Name 脂溶性LipoCy3 Me SE
CAT# LipoCy3 Me SE-1mg/2450元 CAS#  
Storage# −20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure Shelf Life# 12months
Ex(nm)# 548 Em(nm)# 562
MW# 589.17 Solvent# Water or DMSO
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