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双萤光素酶报告基因检测试剂盒Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
Figure 1. Bioluminescent reactions catalyzed by firefly luciferase and Renilla luciferase.
萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的最强发光波长为465nm。
本试剂盒的光信号可以通过化学发光仪、酶标仪或液闪测定仪进行测定。该试剂盒具有检测迅速、灵敏度高、检测范围广，无细胞内源活性干扰等特点。
将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
1.1) 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。
注：裂解产物可室温保存 6 h，-70℃可长期存放(裂解产物不能反复冻融);
2. Preparation of Firefly Working Solution
2.2) 配置10 mg/mL D-luciferin储存液。2mg组份E溶解在200uL超纯水中。储存液-20℃可以储存6个月反复冻融5次。
2.3）工作液配置 ：用组分 B 按照1:50稀释以上D-luciferin储存液，配制成 0.2 mg/mL 的萤火虫萤光素酶工作液。
注：萤火虫萤光素酶工作液不能反复冻融超过5次，若单次实验用量较少，建议按单次使用量分装成小规格。
3. Preparation of Renilla Working Solution
3.2) 配置2 mg/mL Coelenterazine储存液。400ug组份C溶解在200uL超纯水中。储存液-20℃可以储存3个月反复冻融5次。
3.3）工作液配置 ：用组分 D 按照1:50稀释以上coelenterazine储存液，配制成 0.04 mg/mL 的1x coelenterazine工作液。
注：1×Coelenterazine工作液现配现用，配置后在3小时内使用。
4.1）按仪器操作说明书开启具有检测化学发光功能的仪器如酶标仪。
4.2）每个样品测定时，取样品 20-100uL(如果样品量足够，请加入 100 μL；如果样品量不足可适当减少用量，但检测孔用量需保持一致）。1× Lysis Buffer 为空白对照。
4.3）加入 100uL萤火虫萤光素酶检测液，用枪吹打均匀或用其它适当方式混匀后测定 RLU（relative light unit）值。
注：由于该发光为瞬时发光，建议加入萤火虫萤光素酶工作液后，立即进行检测。
4.4）加入 100uL 1× Coelenterazine 工作液，用枪吹打均匀或用其它适当方式混匀后测定 RLU（relative light unit）值。
2) 由于温度对酶反应有影响，所以测定时，样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
3 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅。
4) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！
精益求精的极致科学研究，在细微中展现，铸就产品品质之美;
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