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腔肠素 Coelenterazine Native & H

腔肠素(Coelenterazine)是自然界中资源丰富的天然荧光素,是绝大多数海洋发光生物(超过75%)的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物,如海肾荧光素酶(Rluc),Gaussia分泌型荧光素酶(Gluc),以及包括水母发光蛋白(aequorin)和薮枝螅发光蛋白(Obelia)在内的光蛋白(Photoproteins)。与甲虫(或萤火虫)荧光素/荧光素酶系统不同,腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷(ATP),更便于体内生物荧光的研究。因此,腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。 目前商业化的腔肠素应用普遍的是腔肠素Coelenterazine native和Coelenterazine h。理论上这些腔肠素可用于相同的实验,但是由于其发光波长,细胞膜渗透性,光量子效率上的差异,使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。
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21150-1mg/360元;21152-1mg/360元
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Coelenterazine Native & Coelenterazine H 腔肠素

 

包装量:

产品编号

产品名称

英文名称

CAS

规格/价格

21150

天然腔肠素

Coelenterazine Native

55779-48-1

1mg/360

 

产品编号

产品名称

英文名称

CAS

规格/价格

21152

腔肠素 h

Coelenterazine h

50909-86-9

1mg/360

产品运输与储存:

冰袋运输;粉末-20℃避光干燥保存,最好保存在惰性气体环境下,避免接触空气;长期保存于-70℃。有效期 2 年。

背景介绍

腔肠素(Coelenterazine)是自然界中资源丰富的天然荧光素,是绝大多数海洋发光生物(超过75%)的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物,如海肾荧光素酶(Rluc),Gaussia分泌型荧光素酶(Gluc),以及包括水母发光蛋白(aequorin)和薮枝螅发光蛋白(Obelia)在内的光蛋白(Photoproteins)。与甲虫(或萤火虫)荧光素/荧光素酶系统不同,腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷(ATP),更便于体内生物荧光的研究。因此,腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

目前商业化的腔肠素应用普遍的是天然腔肠素(Coelenterazine native),另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验,但是由于其发光波长,细胞膜渗透性,光量子效率上的差异,使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。
 
腔肠素应用方向:
1、腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物;
2、腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光,细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号,因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧(ROS)水平。
3、更为重要的一个功能,水母发光蛋白复合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔肠素组成。只有当钙离子(Ca2+)与该复合物结合后,腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide,同时释放出CO2和蓝色荧光(~466 nm)。正是此Ca2+依赖性的反应过程,使得腔肠素非常适用于监测活细胞内钙离子水平。
 

腔肠素的种类

天然腔肠素(Coelenterazine Native)

也叫腔肠素游离酸,是海肾荧光素酶(Rluc)和Gaussia荧光素酶(Gluc)等多种荧光素酶的作用底物,也是水母发光蛋白的辅助因子。

产品应用:检测活细胞中钙离子浓度、基因报告分析、BRET(生物发光共振能量转移)研究、ELISA、HTS以及组织或细胞中ROS水平的化学发光检测等。
 

腔肠素h(Coelenterazine h)

是海肾荧光素酶(Rluc)和Gaussia荧光素酶(Gluc)等多种荧光素酶的作用底物,也是水母发光蛋白的辅助因子。

产品应用:发光强度比天然腔肠素高10倍以上,适用于报告基因分析,活细胞中钙离子浓度检测。
 

腔肠素hcp(Coelenterazine hcp)

是天然腔肠素的衍生物之一。腔肠素hcp-水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍,且量子产量高和Ca2+反应速度快,非常适合用于钙离子水平的检测。

产品应用:适合用于钙离子水平的检测。
 

腔肠素400a(Coelenterazine 400a)

天然腔肠素的衍生物之一,也称为DeepBlue CTM,是海肾荧光素酶(Rluc)的良好底物,其发射波长在400nm左右,对GFP受体蛋白的信号干扰小,不能被Gaussia分泌型荧光素酶(Gluc)氧化。

产品应用:BRET(生物发光共振能量转移)研究的首选腔肠素类底物
 

腔肠素f(Coelenterazine f)

与天然腔肠素结构上的唯一差别在于将其R-1位酚基上的羟基替换成氟(F),是水母发光蛋白(aequorin)的首选底物。与天然腔肠素-水母蛋白(Apoaequorin)复合物产生的光子总数相比,此复合物仅产生80%的光子能。其优点在于:仅需非常少的时间来生成aequorin复合物。当其与Ca2+接触,即可快速且高产量的发光,产能强度是天然腔肠素的20倍。另外其具有好的细胞渗透性。

产品应用:当需要极高的Ca2+检测灵敏度来研究水母蛋白再生实验,推荐使用本底物。
 

腔肠素cp(Coelenterazine cp)

是天然腔肠素的衍生物之一。其与水母蛋白(Apoaequorin protein)形成的光蛋白复合物的发光强度是天然腔肠素的15倍,且具有更快的Ca2+反应速率。

产品应用:可用于 G-蛋白偶联受体(GPCRs)药物的高通量筛选研究。
 

腔肠素n(Coelenterazine n)

所有的腔肠素衍生物中荧光强度是较弱的,且对Ca2+反应速率也明显低于天然腔肠素。
 

腔肠素e(Coelenterazine e)

一种天然腔肠素衍生物,结构上比天然腔肠素多了一个乙基。作为海肾荧光素酶的底物,其荧光强度是天然腔肠素的137%。腔肠素e具有较高的体外水母发光蛋白反应性,且具有双发射峰(405& 465),从而可在pCa5-7范围内通过双波长的比例测定Ca2+浓度,由于该法不依赖于腔肠素浓度,因此提高了检测精确性。因该衍生物的细胞通透性较差,所以对于细胞内相关实验则无此优势,。

产品应用:非常有用的Ca2+低灵敏检测底物。
 

二甲基腔肠素(Coelenterazine 2-methyl )

是一种细胞强抗氧化剂,可高效作用于细胞内的活性氧,如单态氧和超氧阴离子,而氧化应激是细胞凋亡过程的中介环节,另外该化合物具有无毒、细胞膜通透性等特性,故可用于研究细胞凋亡。

产品应用:

1)作为研究细胞凋亡的重要工具;

2)二甲基腔肠素还可通过化学发光法来检测超氧阴离子和过氧亚硝酸阴离子水平。

 

天然腔肠素(Coelenterazine Native)产品性质

英文别名(English synonym)                                 Renilla luciferin; Coelenterazine free base

CAS 号(CAS NO.)                                        55779-48-1

分子式(Formula)                                                C26H21N3O3

分子量(Molecular weight)                                    423.46 g/mol

外观(Appearance)                                              黄色固体

溶解性(Solubility)                                               溶于甲醇和乙醇,不溶于 DMSO

纯度(Purity)(TLC)                                           >97%

结构(Structure)

 

腔肠素h(Coelenterazine h)产品性质

英文别名(English synonym)                                腔肠素h Coelenterazine h

CAS 号(CAS NO.)                                        50909-86-9

分子式(Formula)                                                C26H21N3O2

分子量(Molecular weight)                                   407.48 g/mol

外观(Appearance)                                              淡黄色固体

溶解性(Solubility)                                               溶于甲醇和乙醇,不溶于 DMSO

纯度(Purity)(TLC)                                           >98%

结构(Structure)

 

腔肠素的溶解

对于所有进行荧光信号检测的试验建议溶液现用现配。建议可用乙醇或丙二醇配制成储存液(配制浓度可参考文献推荐)。在使用时需将储存液用合适的缓冲液稀释成工作液。

注意:1)在用蒸馏水或者 PBS 及其他的溶液进行腔肠素储存液的稀释时需排除稀释液中的气泡。同时工作液最好呈弱酸性,既可以减缓腔肠素的氧化,同时也可防止沉淀的析出。但是弱酸也有可能对后续荧光强度 RLU 的检测造成误差。

2)腔肠素的工作液不稳定,避免过夜保存。

1.     注意事项:

1)       保存时若接触空气,时间过久会使得腔肠素氧化,造成实验结果的不准确性!

2)       对于储存液的制备,较稳定的是保存于丙二醇中,同时可加入还原剂如 L-抗坏血栓,β-巯基乙醇,DTT,DTE(二硫赤糖醇),或少量的盐酸。还原剂的存在可能会破坏荧光素酶的结构,也会影响腔肠素的氧化速率。

3)       腔肠素在醇类物质中的冰冻保存可能会导致沉淀的析出(和浓度有关),可通过将溶液加热至 50-60至其溶解。在使用前请确保眼观无沉淀。

4)       最适溶剂的选择取决于多种因素,如还原剂。对于水母发光蛋白的检测,可选用β-巯基乙醇,因为此还原剂能够使水母发光蛋白更好地与腔肠素作用。但对于 Gluc 蛋白的检测,由于蛋白中含有 5 对二硫键,在还原剂的存在状态下不能够检测到荧光信号。

5)       腔肠素在不同溶剂中的溶解特性:(单位:mg/mL)

 

Solvents

Room Temp (RT)

60°C (heat, vortex)

Methanol 100%

46

70

Ethanol 100%

64

196

Propanol 100%

82

204

Butanol 100%

86

180

Propylene Glycol

24

240

b-Mercaptoethanol

160

268

注:a:腔肠素的丙二醇溶液在室温下的溶解度较低,但是在-70的状态下没有沉淀析出。

b:腔肠素在β-巯基乙醇中的溶解度在室温和 60时都是最高的,但能够稳定存在的时间还有待进一步测试.

6)当使用多孔板进行荧光值的检测时,建议通过设置对照孔来消除由于腔肠素在工作液中不断被氧化所带来的误差.

 

特别提醒:

1) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅。

2) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!

 

产品参数

Name Coelenterazine 腔肠素
CAT#   CAS#  
Storage# -20℃ Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing Shelf Life# 24 months
Ex(nm)#   Em(nm)#  
MW#   Solvent#

 

腔肠素的种类

产品名称

分子量

分子式

Em (nm)

RLC*

Relative Intensity

Half-rise time (ms)**

天然腔肠素Coelenterazine native

423.46

466

1.00

1

6-30

腔肠素h Coelenterazine h

407.48

466

0.75

16

6-30

腔肠素hcp

Coelenterazine hcp

399.48

445

0.65

500

2-5

腔肠素cp

Coelenterazine cp

415.48

442

0.63

28

2-5

腔肠素f

Coelenterazine f

425.46

472

0.80

20

6-30

腔肠素n Coelenterazine n

457.52

468

0.25

0.15

6-30

腔肠素e Coelenterazine e

449.5

405 & 465

0.5

4

0.15-0.3

2-methyl Coelenterazine 二甲基腔肠素

331.37

/

/

/

/

腔肠素 400a

Coelenterazine 400 a

391.48

400

/

/

/

 

 

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