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Super Fluor® 488 NHS(~Alexa Fluor 488 SE)

Super Fluor 系列可完全替代Alexa Fluor 系列.

Super Fluor荧光探针具有更强的荧光强度

Super Fluor荧光探针有更广的pH应用范围(pH 4~10)

Super Fluor荧光探针更好的抗淬灭性。

Super Fluor在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。 
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产品编号
1023-1mg/3095元
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产品描述
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Super Fluor® 488,555, 647, 680, 750活化酯标记抗体

 Super Fluor®为北京富百科生物技术有限公司注册商标,未经授权严禁使用! 

Super Fluor SE=Super Fluor NHS=Super Fluor琥珀酰亚胺酯 (琥珀酰亚胺酯SE(Succinimidyl esters) = N-羟基琥珀酰亚胺NHS(N-Hydroxy succinimide)

1.产品简介  

 Super Fluor 系列(可替代Alexa Fluor 系列)荧光探针,具有更强的荧光强度,更广的pH应用范围(pH 410更好的抗淬灭性。在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。 

表 Super Fluor 488555, 647, 680, 750活化酯的性质参数

 

488

555

647

680

750

活化酯分子量

~900

 ~1250

 ~1300

~1150

 ~1300

最大吸收波长(nm)

494

555

647

680

750

摩尔吸光系数(M-1cm-1)

71 000

150 000

239 000

184000

240 000

最大发射波长(nm)

524

565

665

702

775

A280nm /Amax

11%

8%

3%

5%

4%

 

2. Super Fluor 标记抗体的参考方案:

 

1) 蛋白溶解:用0.1 M NaHCO3溶解至终浓度为2mg/mL

   将1ml 去离子水加入84mgNaHCO3瓶中,配成1M 的碳酸氢钠溶液。振荡或吹打至完全溶解。该溶液pH 约8.3,2~6℃保存可用2 星期;若抗体是溶液,将抗体稀释至2mg/mL,再加入1/10 体积的上述碳酸氢钠溶液;若抗体是冻干粉,将1M 碳酸氢钠溶液用10 倍去离子水稀释成0.1M 后,用其将抗体溶成2mg/mL的溶液;

2)染料溶解:活化Super Flour SE染料固体粉末从冰箱放入干燥器中慢慢升至常温后,用无水DMSO(推荐使用SigmaAldrich货号276855)将染料配置浓度为1 mg/mL。

3)标记:在1mL蛋白溶液中缓慢加入适量染料溶液,(蛋白:染料摩尔比=1:20~50;质量比可在以下范围内优化10~200ug Super Flour SE 每毫克IgG抗体)。同时在暗处常温缓慢搅拌1小时。也可以直接将蛋白溶液直接加入染料的固体粉末的试剂瓶中,同时在暗处常温缓慢搅拌1小时。

4)纯化:用透析法或者葡聚糖Sephadex纯化产品后,产品冷冻干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM叠氮化钠溶液中,-20℃避光储存。

5)贮存:标记好的蛋白贮存于2~6℃,避光。若纯化的蛋白偶联物浓度小于1mg/mL,加入BSA 或其他稳定蛋白1~10mg/ml。在2mM 叠氮钠存在的情况下,2~6 度可保存几个月。保存更长时间,则需分装后-20℃保存。避免反复冻融,避光保存。


3.计算标记比例F/P值:

 

对于IgG 等大多数抗体来说,摩尔吸光系数为203000,F/P值在4~9 之间是最合适。

 

 

Super Flour 488标记蛋白F/P值计算:

1)用PBS 精确倍数稀释定量的少许纯化过的偶联蛋白,在1cm比色皿中测定280nm和494nm的光吸收;

2)计算样品中的蛋白浓度:蛋白摩尔浓度=(A280-(A494×0.11))×稀释倍数/203000

3)计算标记比例:每摩尔蛋白结合的染料摩尔数=A494×稀释倍数/(71000×蛋白摩尔浓度)

 

4. 活性染料稳定性与储存:

 请注意:未开封的粉末在避光干燥-20℃可存放6月。其水溶液现配现用不能储存。任何溶解后的染料最好立即使用;无水的DMSO溶液-20°C保存最多2个星期(无水DMSO推荐使用SigmaAldrich货号276855)

 

特别提醒:

1) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅。

2) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!

 

产品参数

Name Super Fluor® 488 NHS(~Alexa Fluor 488 SE)
CAT# 1023-1mg CAS# N/A
Storage# −20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure Shelf Life# 12个月
Ex(nm)# 494 Em(nm)# 518
MW# N/A Solvent# DMSO
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