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SafeStain® GelStain® 核酸染料(>SafeRed), Page胶肉眼可观测条带(不需要激发光)

1.富百科专利产品第四代核酸染料SafeStain(发明专利ZL202210145256.6)
2.带形美观:电泳条带清晰整齐美观。
3.方便观测:用手持紫外灯或者手持蓝光仪都可以随时观察电泳情况。
4. 相对安全:独特油性大分子(分子量>1000)没有EB类似的诱变性。
5.兼容Red和Green---SafeStain适用于紫外成像仪/激光成像仪和蓝光仪!
6.  Page胶肉眼可观测条带(不需要激发光,包括紫外和蓝光)
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产品编号
F088-500uL/支/980元
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产品描述
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SafeStain® GelStain® Nucleic Acid GelStain

                      SafeRed®, SafeView®, SafeStain®和GelStain®为北京富百科生物技术有限公司注册商标,未经授权严禁使用!

SafeStain®酸染料特点

1. 带形美观:富百科专利产品第四代核酸染料SafeStain克服了国外同类染料分不开大片段DNA的缺点,电泳条带清晰整齐美观。(发明专利ZL202210145256.6)(富百科美国发明专利US11952518B2) 

2.方便观测:用手持紫外灯或者手持蓝光仪都可以随时观察电泳情况。

3. 相对安全:独特油性大分子(分子量>1000)使其不能穿透细胞膜进入细胞, 富百科Ames-test实验表明,在凝胶染色浓度下该染料的没有EB类似的诱变性,使用安全,可以代替致癌物溴化乙锭EB作为各种核酸电泳的染色剂。

4. 完美兼容:兼容Red和Green---SafeStain同时适用于紫外成像仪/激光成像仪和蓝光仪!同时拥有EB和Sybr Green类似的光谱,无需改变滤光片及观察装置:标准 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用。

5.  Page胶肉眼可观测条带(不需要激发光,包括紫外和蓝光)。

6.    迁移率好:EB小分子很快跑出胶外,所以EB容易导致小DNA片段看不清,大分子SafeStain完全克服这一点。

7.    定量准确:适用于核酸分子大小的确定和定量,EB对小DNA片段定量不准确。

8.  染色均匀:电泳时染色均匀,整片胶的背景一样。EB会导致胶的整体背景不同,经常出现阴阳背景(胶的背景部分亮,另一部分暗);EB长时间、长距离的电泳,EB信号强度会相应下降。我们的大分子SafeStain完全克服这一点。

9. 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。

10.    稳定性高:适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中稳定。

11. 耐光性强:实验室的日常环境下可以常温放置24个月。

12. 信噪比好:样品荧光信号强,背景信号低,肉眼可观测到亮度明显比EB强,EB会导致胶的整体背景稍微高些,经常出现阴阳背景。

13. 操作简单:与EB用法完全一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗。

14. 适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。

产品包装:   SafeStain 10000x Nucleic Acid Gel Stain  500uL/支;        储存条件:  室温避光可保存24个月。

 

         

 

操作步骤:

一.胶染法(推荐方法,用法类似EB)

制胶时加入SafeStain核酸染料(染料灵敏,每100mL 琼脂糖溶液中加入10μL SafeStain原装液即可)。 按常规方法电泳。

1. 实验室材料和试剂:

(1)实验样品:质粒DNA,DNA marker(国产的DNA marker浓度太高,至少稀释2~3倍后使用!)

(2)TBE缓冲液配置:10X TBE电泳缓冲液[Tris 107.8146g (890mM),硼酸55.0287g(890mM),EDTA 5.845g(20mM),加NaOH约4g调节pH=8.3;定容1000mL;用ddH2O稀释10倍配制1X TBE电泳缓冲液。 

(3)TAE缓冲液配置:50X TAE电泳缓冲液[Tris 242g (2M),EDTA 37.2g(100mM),加醋酸约57ml调节pH=8.5;定容1000mL];用ddH2O稀释50倍配制1X TAE电泳缓冲液。

(4)溴酚蓝指示剂,1%的西班牙琼脂糖凝胶

(5) 仪器:电泳仪(130v),移液器(0.5~10ul),凝胶成像仪

2. 实验步骤:

(1)制胶:将0.5g琼脂糖溶于50mL 1X TBE电泳缓冲液中,加热至琼脂糖完全融化。将融好的琼脂糖溶液室温放置50℃左右加入5ul的SafeStain凝胶电泳染料,摇匀。

(2)倒胶:将制好的琼脂糖凝胶缓慢倒于制胶托盘内,避免产生气泡。将点样梳子垂直置于电泳胶膜的一端,距离托盘底部约1mm。放置时尽量保持平稳,切勿晃动。

(3)置胶:待约30分钟左右胶体充分凝固后,缓慢垂直向上拔起点样梳子,切勿用力过猛。(夏季适当延长凝胶时间)

(4)将琼脂糖凝胶放入电泳槽内,加入电泳缓冲液,使电泳缓冲液液面高于凝胶面约1~2mm。

(5) 将混合溴酚蓝指示剂的DNA样本(1ul溴酚蓝与2ul DNA标本混合)加入到点样孔内。

(6)盖上电泳槽盖,开启电源,使DNA从负极移向正极恒压电泳(电压恒定在120~130v之间,一般可选择130V)。

(7)当DNA条带距离点样孔约1~2cm后关闭电源,(约30~40分钟)取出凝胶。

(8)用 302nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。

*注:此方法染色染料用量相对较少。染料加入胶中可直接使用微波炉加热,制好的胶溶液可以在室温下保存直至用完

 

优化电泳条件参考事项: 

1) 因为EB是插入DNA内部变成一个整体分子,所以不容易出现迁移/弥散的问题,而大分子的SafeStain与DNA是通过静电吸引非共价结合的,在DNA外面偶尔出现条带迁移,特别是大片段DNA!

2) 染料过于灵敏,建议marker浓度稀释一倍,特别是含大片段多的marker!国产的marker是基于EB染料开发的酶切的混合片段,浓度偏高;另外,EB显示不出来酶切的混合片段的杂带,SafeStain的高灵敏性会显示出来。少数情况下质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低,请使用后染法。

3) 染料过于灵敏,建议未知浓度的样品的稀释一倍后上样,特别是含大片段多的样品。推荐上样量为50~200ng/泳道(8泳道小胶孔)

4)与EB相比,SafeStain电泳电压要低一些,电泳时电压不宜过高,一般不要超过130V。跑胶的时间40~60min。

5) SafeStain染料和样品混合后,点样到琼脂糖凝胶中,不推荐这种点样法。

6) 由于SafeStain具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。摇晃振荡以保证染料充分混匀。可以将SafeStain原液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,用微波炉加热以制备琼脂糖凝胶。SafeStain兼容所有常用的电泳缓冲溶液。

7) 如果总是看到条带弥散或分离不理想,为了避免染料可能对DNA迁移的干扰,建议使用电泳后染胶。使用后染法(泡染法)染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关!

*此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法

 

二.泡染法

(1)按照常规方法进行电泳。(用于胶回收等DNA高浓度的样品实验强烈推荐泡染的方法!)

(2)用H2O将SafeStain 10,000× 储液稀释约1万倍到0.1M NaCl溶液中,制成1× 染色液。(例如将5μL SafeStain 10,000× 原液加入到50mL 0.1M NaCl溶液中)。

(3)将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的1× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5~10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min到1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。

(4)用 302nm 激发的 UV 凝胶成像系统或者蓝光仪下观察结果。

*注意事项:用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右;1× SafeStain®染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完

 

三.核酸电泳的PAGE步骤:Page胶实验室灯光下,肉眼可观测条带,不需要外源激发光(包括紫外和蓝光)

1)将TBE制备的凝胶放入电泳槽中,用夹子夹住边缘。

2)用配置凝胶溶液同一批次的5×TBE灌满缓冲液槽。用注射器排除凝胶底部的气泡。

3)用注射器吸取1×TBE冲洗加样孔。将DNA样品和适量的6×凝胶上样缓冲液混合,用微量移液管加入加样孔。

4)将电极与电源相连(正极接下槽),打开电源一般90V;1~8V/cm。进行电泳9h。

5)电泳至标准参照染料迁移至所需位置(一般是电泳到二甲苯完全迁出,溴酚蓝距底边2~3cm停止)。关闭电源,拔掉插头,弃去电泳槽中的电泳液。

6)将凝胶取下来放入,染色皿中,加1X SafeStain的1X缓冲液中的振荡染色30-60分,放置在紫外检测即可。

*注意事项:与琼酯糖凝胶不同,不能用预染或点染的方法;只能用泡染的方法显色,由于聚丙烯酰胺比较致密,染料不容易深入,显色效果没有琼酯糖凝胶好

 

 

特别提醒:

1)SafeStain同时适用于紫外成像仪,激光成像仪和蓝光仪,下观测的核酸电泳染料!

2) Page胶实验室灯光下,肉眼可观测条带, 不需要外源激发光(包括紫外和蓝光)。

3) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅。

4) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!

 

产品参数

Name SafeStain® GelStain® 核酸染料(>SafeRed), Page胶肉眼可观测条带(不需要激发光)
CAT# 088-500uL CAS# N/A
Storage# 4℃ Sealed & desiccated & Minimized light exposure &Minimized Freezing And Thawing Shelf Life# 24 months
Ex(nm)# 290nm,304nm,480nm,520nm Em(nm)# 520nm,590nm
MW#   Solvent#  
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