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Femto ECL®特超敏发光液

FemtoECL特超高灵敏度底物是用于HRP的增强型化学发光底物:

特别灵敏—在硝化纤维膜或PVDF膜上检测丰度为低飞克级的蛋白条带

定量准确—所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级

明亮信号—通过胶片或成像系统进行曝光,易于捕获图像

长时间持续发光—优化条件下,可检测的光信号长达8小时

试剂特别稳定—在4°C条件下稳定放置一年,在室温下可稳定放置6个月
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市场价
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产品编号
046-100mL/1800元(50mL A液+50mL B液)
数量
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产品描述
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Femto ECL®化学发光底物

 DuraECL®, FemtoECL®,PicoECL®,ECLplus®为北京富百科生物技术有限公司注册商标,未经授权严禁使用!

 

 保存:室温运输,收到后在4℃避光下储存试剂 

    Femto ECL®是一款具有特超高灵敏度的增强型化学发光(ECL)底物,也是我们富百科四款ECL发光液中的灵敏度最好的化学发光底物,由于采用了富百科核心技术基于“荧光震荡”机理设计的发光底物系统。可通HRP实现实现低飞克级(以HRP浓度为准)的免疫印迹检测,其灵敏度,发光时间和背景均明显优秀。

 

产品简介

FemtoECL特超高灵敏度底物是用于辣根过氧化物酶(HRP)的增强型化学发光底物,有以下特点:

• 灵敏—使用适当的一抗和二抗时,可在硝化纤维膜或PVDF膜上检测丰度为飞克级的蛋白条带

• 定量—所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级

• 明亮信号—通过胶片或成像系统进行曝光,易于捕获图像

• 长信号持续时间—优化条件下,可检测的光信号输出长达8小时

• 稳定试剂—试剂盒组分能够在4°C条件下稳定放置一年,在室温下可稳定放置6个月

• 价格经济— 配方经过优化,可适用于浓度极低的抗体检测

• 1ng至0.2 µg/mL一抗(以1 µg/mL储存液稀释1:5,000至1:100,000倍)

• 2ng至10 ng/mL二抗(以1 µg/mL储存液稀释1:100,000至1:500,000倍)

 当Femto ECL底物与优化的抗体浓度和封闭缓冲液配合使用时,可检测到常规ECL底物无法检测的低丰度靶标蛋白。

 

重要提示: 所有产品仅限用于研发,必须生物技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!

 

操作概述

  注:优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度,以保证阳性结果。有关建议的稀释度范围请参考其他所需材料。

1)  将一抗浓度稀释到1ng至0.2 ng/mL(以1 µg/mL储存液稀释1:5,000至1:100,000倍)

2) 将二抗浓度稀释到2ng至10 ng/mL(以1 µg/mL储存液稀释1:100,000至1:500,000倍)

3) 将两种底物组份按1:1比例混合,制备底物工作液。

注:暴漏于日光或任何其他强光可能损害工作液,为获得最佳结果,将此工作液保存在琥珀色瓶中,并避免长期暴漏于任何强光。短时间暴漏于实验室常规照明不会损害该工作液。

4) 将印迹膜在 Femto ECL底物工作液中孵育5分钟。

5) 吸出多余试剂。用清洁的塑料膜盖住该印迹膜。

6)  使印迹膜在X光胶片上曝光。

 

其他所需材料

• 已完成转印的印迹膜:用合适的电泳法分离蛋白质,并将这些蛋白质转移到硝酸纤维素膜上。

• 稀释缓冲液:使用Tris或磷酸盐缓冲液。

• 洗涤缓冲液:将5mL 10%的Tween-20加入1000mL稀释缓冲液(Tween-20的终浓度将0.05%)。

• 封闭试剂:将0.5mL10%的Tween-20加入100mL的封闭缓冲液,选择一种与稀释缓冲液具有相同基本组分的封闭缓冲液。

• 一抗: 选择一种目标蛋白质特异性抗体。使用稀释缓冲液制备该抗体的储存液。使用封闭试剂将抗体从储备液稀释成抗体工作液。最佳稀释度取决于一抗和膜上的抗原量。

• HRP标记的二抗:选择一种与二抗特异性结合的HRP标记二抗,使用稀释缓冲液制备该抗体的储存液。使用封闭试剂将抗体从储备液稀释成抗体工作液。稀释度介于1:100000和1:500000之间或抗体工作液浓度为2~10ng/ml。该浓度范围在使用链亲和素-HRP时也适用。二抗的最佳稀释度取决于HRP标记二抗和膜上的抗原量。

• 用于处理放射显影胶片的胶片暗盒、显影和定影试剂

• 用于孵育的旋转摇床。

 

蛋白印迹法详细操作步骤

1) 将印记膜从蛋白转印设备中取出,加入合适的封闭液在温室下孵育20-60分钟,同时振荡。以封闭膜上非特异性蛋白结合位点。请注意:使用在前文建议的抗体稀释度是非常重要的。

 2) 将膜从封闭液中取出,与一抗工作液在温室孵育1小时,同时振荡;或在28℃孵育过夜,不振荡。

 3) 将足量的洗涤缓冲液加至膜上,保证缓冲液将膜完全覆盖。振荡孵育≥5分钟,更换洗涤缓冲液并重复该步骤4-6次。增加洗涤缓冲液体积,洗涤次数和洗涤时间有助于降低背景信号。

注:孵育前,膜在洗涤缓冲液中的短暂淋洗会提高洗涤效率。

请注意:使用在前文建议的HRP标记二抗稀释度是非常重要的。

 4) 将HRP标记的二抗工作液与膜在温室孵育1小时,同时振荡。

 5) 重复步骤3,以除去未结合的HRP标记二抗。注:膜与HRP标记二抗孵育后必须进行彻底洗涤。

 6) 将A溶液与B液等比例混合,制备成工作液。每cm2膜使用0.01~0.1ml工作液。工作液可以在温室下稳定8小时。注:日光或任何其他强光下可能损害工作液,为获得最佳结果,将此工作液保存在琥珀色瓶中,并避免任何强光长期照射,短时间实验室常规照明不会损害该工作液。

 7) 将印记膜在工作液中孵育5分钟。

 8) 从工作液中取出印记膜,并置于一个塑料片或清洁的塑料纸(膜)中,用一张吸水纸吸除多余的液体,并从印记和塑料纸之间小心地压出气泡。

 9) 将包在塑料纸(膜)中的印记膜置于胶片暗盒中,蛋白质面朝上,除适用于胶片曝光的灯(如红色安全灯)之外,关闭所有的灯。

注;胶片必须在曝光期间保持干燥,为获得最佳效果,采取以下措施:

*   确保将多余的底物从膜和塑料纸上完全去除。

*   在整个胶片处理期间,使用手套。

*   切莫将印记膜置于已显影的胶片上,因为胶片上的化学物质会减弱信号。

 10) 将X光胶片置于膜的上面。建议第一次曝光60秒。之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前5-30分钟期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时,但强度会随时间下降,如有底物孵育后较长时间后曝光,曝光时间可能需要延长以获得较强信号。如果使用磷光存储成像设备(如Bio-Rad的分子成像仪系统)或CCD照相机可能需要较长的曝光时间。

    警告:胶片与膜之间的任何移动可能在胶片上造成人为的非特异信号。

11) 使用合适的显影剂和定影剂对胶片进行显影。如果信号太强,则缩短曝光时间或将印记膜进行剥离并降低抗体浓度重新检测。

 

 

不同ECL发光液检测灵敏度

产品名称

检测浓度

推荐一抗孵育浓度(ng/mL)

推荐二体孵育浓度(ng/mL)

ECL plus

皮克级~10-12g

一抗浓度:100~500

二抗浓度:10~50

Pico ECL

皮克级至飞克级10-12g~10-15g

一抗浓度:10~200

二抗浓度:5~50

Femto ECL 

小于飞克级<10-15g

一抗浓度:2~100

二抗浓度:2~20

Dura ECL

小于飞克级<10-15g

一抗浓度:1~100

二抗浓度:1~10

 

特别提醒:

1) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅。

2) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!

 

产品参数

Name Femto ECL®特超敏发光液
CAT# 046-100mL; 046-500mL CAS# N/A
Storage# 4℃ Sealed & desiccated & Minimized light exposure Shelf Life# 12 months
Ex(nm)# N/A Em(nm)# N/A
MW# N/A Solvent# N/A
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