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Femto ECL®特超敏发光液
特别灵敏—在硝化纤维膜或PVDF膜上检测丰度为低飞克级的蛋白条带
定量准确—所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级
明亮信号—通过胶片或成像系统进行曝光,易于捕获图像
长时间持续发光—优化条件下,可检测的光信号长达8小时
试剂特别稳定—在4°C条件下稳定放置一年,在室温下可稳定放置6个月
Femto ECL®化学发光底物
DuraECL®, FemtoECL®,PicoECL®,ECLplus®为北京富百科生物技术有限公司注册商标,未经授权严禁使用!
FemtoECL特超高灵敏度底物是用于辣根过氧化物酶(HRP)的增强型化学发光底物,有以下特点:
• 灵敏—使用适当的一抗和二抗时,可在硝化纤维膜或PVDF膜上检测丰度为飞克级的蛋白条带
• 长信号持续时间—优化条件下,可检测的光信号输出长达8小时
• 稳定试剂—试剂盒组分能够在4°C条件下稳定放置一年,在室温下可稳定放置6个月
• 1ng至0.2 µg/mL一抗(以1 µg/mL储存液稀释1:5,000至1:100,000倍)
• 2ng至10 ng/mL二抗(以1 µg/mL储存液稀释1:100,000至1:500,000倍)
当Femto ECL底物与优化的抗体浓度和封闭缓冲液配合使用时,可检测到常规ECL底物无法检测的低丰度靶标蛋白。
重要提示: 所有产品仅限用于研发,必须生物技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!
注:优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度,以保证阳性结果。有关建议的稀释度范围请参考其他所需材料。
1) 将一抗浓度稀释到1ng至0.2 ng/mL(以1 µg/mL储存液稀释1:5,000至1:100,000倍)
2) 将二抗浓度稀释到2ng至10 ng/mL(以1 µg/mL储存液稀释1:100,000至1:500,000倍)
注:暴漏于日光或任何其他强光可能损害工作液,为获得最佳结果,将此工作液保存在琥珀色瓶中,并避免长期暴漏于任何强光。短时间暴漏于实验室常规照明不会损害该工作液。
4) 将印迹膜在 Femto ECL底物工作液中孵育5分钟。
• 已完成转印的印迹膜:用合适的电泳法分离蛋白质,并将这些蛋白质转移到硝酸纤维素膜上。
• 洗涤缓冲液:将5mL 10%的Tween-20加入1000mL稀释缓冲液(Tween-20的终浓度将0.05%)。
• 封闭试剂:将0.5mL10%的Tween-20加入100mL的封闭缓冲液,选择一种与稀释缓冲液具有相同基本组分的封闭缓冲液。
• 一抗: 选择一种目标蛋白质特异性抗体。使用稀释缓冲液制备该抗体的储存液。使用封闭试剂将抗体从储备液稀释成抗体工作液。最佳稀释度取决于一抗和膜上的抗原量。
1) 将印记膜从蛋白转印设备中取出,加入合适的封闭液在温室下孵育20-60分钟,同时振荡。以封闭膜上非特异性蛋白结合位点。请注意:使用在前文建议的抗体稀释度是非常重要的。
2) 将膜从封闭液中取出,与一抗工作液在温室孵育1小时,同时振荡;或在28℃孵育过夜,不振荡。
3) 将足量的洗涤缓冲液加至膜上,保证缓冲液将膜完全覆盖。振荡孵育≥5分钟,更换洗涤缓冲液并重复该步骤4-6次。增加洗涤缓冲液体积,洗涤次数和洗涤时间有助于降低背景信号。
4) 将HRP标记的二抗工作液与膜在温室孵育1小时,同时振荡。
5) 重复步骤3,以除去未结合的HRP标记二抗。注:膜与HRP标记二抗孵育后必须进行彻底洗涤。
8) 从工作液中取出印记膜,并置于一个塑料片或清洁的塑料纸(膜)中,用一张吸水纸吸除多余的液体,并从印记和塑料纸之间小心地压出气泡。
9) 将包在塑料纸(膜)中的印记膜置于胶片暗盒中,蛋白质面朝上,除适用于胶片曝光的灯(如红色安全灯)之外,关闭所有的灯。
注;胶片必须在曝光期间保持干燥,为获得最佳效果,采取以下措施:
* 切莫将印记膜置于已显影的胶片上,因为胶片上的化学物质会减弱信号。
警告:胶片与膜之间的任何移动可能在胶片上造成人为的非特异信号。
11) 使用合适的显影剂和定影剂对胶片进行显影。如果信号太强,则缩短曝光时间或将印记膜进行剥离并降低抗体浓度重新检测。
1) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅。
2) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!
| Name | Femto ECL®特超敏发光液 | ||
|---|---|---|---|
| CAT# | 046-100mL; 046-500mL | CAS# | N/A |
| Storage# | 4℃ Sealed & desiccated & Minimized light exposure | Shelf Life# | 12 months |
| Ex(nm)# | N/A | Em(nm)# | N/A |
| MW# | N/A | Solvent# | N/A |
精益求精的极致科学研究,在细微中展现,铸就产品品质之美;
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