Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒

磷脂酰丝氨酸（PS）是一种带负电荷的磷脂，正常细胞中，PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜 PS由脂膜内侧翻向细胞膜外侧，使PS暴露在细胞膜外表面。Annexin V与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
将Annexin V进行荧光标记，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。
采用Annexin V与PI双染的方法，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，右下象限为早期凋亡细胞，右上象限是凋亡晚期细胞和坏死细胞。

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产品编号

2020-20T/400元50T/800元,100T/1200元

所属分类

细胞染色/凋亡及离子探针

数量

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产品描述

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Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒

磷脂酰丝氨酸（PS）是一种带负电荷的磷脂，正常细胞中，PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜PS由脂膜内侧翻向细胞膜外侧，使PS暴露在细胞膜外表面。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
富百科将Annexin V进行绿色荧光（FITC）标记，以标记了的Annexin V作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此采用Annexin V与PI双染的方法，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

图1. 细胞凋亡过程中磷脂酰丝氨酸（PS）外翻示意图

试剂盒组份：

Reagents	20 assays	50 assays	100 assays	Storage
Annexin V-FITC	100 μl	250 μl	500 μl	4°C避光
Propidium Iodide, PI	200 μl	500 μl	1000 μl	4°C避光
Binding Buffer ( 4X )	4 ml	10 ml	20 ml	4°C

所需实验器材：

微量移液器；PBS；不含EDTA的胰酶消化液；低速离心机；流式细胞仪

注意事项：

1. 此试剂盒仅供生物实验研究使用。操作时必须戴口罩/手套/实验服和其它生化实验室防护措施。

2. 微量试剂需离心数秒将试剂收集至管底后再开盖取用。

3. Propidium Iodide操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触。

4. Annexin V-FITC,操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触。

5. 本试剂盒用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量1x10⁵~1x10⁶。

6. 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。

7. Annixin V检测凋亡细胞的方法适用于悬浮生长的细胞，如：淋巴细胞等细胞的检测。对于贴壁生长的细胞，由于在胰酶等消化处理过程中会造成细胞膜的损伤，会造成较高的假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测，可将胰酶消化后的细胞保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。尽管目前，包括国外也有一些单位采用该方法检测贴壁生长的细胞。我不推荐用该方法检测。因为其重复性较差，且需要操作时非常小心。

8. 消化贴壁细胞残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，最终导致染色失败。

9. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。

特别提醒：

1) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅。

2) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！

产品参数

Name	Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒
CAT#	2020	CAS#	N/A
Storage#	-20 °C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing!	Shelf Life#	24 months
Ex(nm)#	490	Em(nm)#	520
MW#	N/A	Solvent#	DMSO

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