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Calcein AM /PI试剂盒
Calcein-AM的乙酸甲基酯亲脂性很高，可透过细胞膜。Calcein-AM本身并不是荧光分子但通过活细胞内的酯酶作用，Calcein-AM脱去AM基，产生的Calcein能发出强绿色荧光 (Ex/Em=490/515 nm)。因此Calcein-AM仅对活细胞染色。
PI作为核染色染料不能穿过活细胞的细胞膜。它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光 (激发: 535 nm，发射: 617 nm)。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发，仅可观察到死细胞。
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浏览量:
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产品编号
30002-500T/800元
所属分类
细胞染色/凋亡及离子探针
数量
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库存:
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产品描述
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I. 试剂 Calcein-AM 4mM 50uL in DMSO; Unit Size #500 assays ·PI (2mM) 150uL in water
用荧光显微镜观察细胞形态，以HeLa细胞染色为例，请注意不同的细胞种类、不同浓度，有不同的观察条件。根据细胞条件，摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。
1) 染色HeLa细胞等贴壁细胞时，先用Trypsin-EDTA等消化细胞，制备成细胞悬液。
3) 去除上清液，加入PBS缓冲液，细胞数量调整至105-106个/ml。再用移液器充分混匀。
4) 由于培养基中的血清等含有酯酶，Calcein-AM遇水会分解，会导致空白上升，所以需要离心数次，用PBS洗涤数次直到完全洗净。
5) 将200 µl细胞悬液移至小试管中，加入100 µl染色工作液，在37℃下孵育15分钟。
7) 在荧光显微镜下，先用490±10 nm波长激发，观察黄绿色的活细胞，还可以同时观察到红色的死细胞，然后用545 nm波长激发，能够看到红色的死细胞。
Calcein-AM和PI最佳浓度根据细胞种类而定，通过以下的操作，可找到不同细胞染色试剂的最佳浓度。
1) 通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中孵育10分钟或通过在70%乙醇中孵育30分钟制备死细胞。
2) 用0.1-10 µM PI溶液对死细胞染色，以便找到仅对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。
3) 用0.1-10 µM Calcein-AM溶液对死细胞染色，以便找到不对细胞质染色的Calcein-AM浓度。接着用该浓度的Calcein-AM对活细胞染色以检验活细胞可否被染色。
1) Calcein-AM的ester部位遇到湿气会分解，使用后请在-20度下密闭冷冻保存，防止水分进入。Calcein-AM储备液用缓冲液或培养基等稀释时尽量现配现用。
2) 使用时一定要带手套、眼罩、口罩。万一接触到皮肤的话，迅速使用大量水清洗。
3 )本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅！
4) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作，同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！
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