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线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)
JC是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时,JC聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可以产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,JC不能聚集在线粒体的基质中,此时JC为单体,可以产生绿色荧光。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)是一种以JC-1为荧光探针,快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒,可以用于早期的细胞凋亡检测。
对于六孔板中的样品,本试剂盒共可以检测100个样品;对于12孔中的样品,本试剂盒共可以检测200个样品。
取10~60万细胞,重悬于0.5mL细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
加入0.5mL JC-1染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育20分钟。
在孵育期间,按照每1mL JC-1染色缓冲液(5×)加入4mL蒸馏水的比例,配制适量的JC-1染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
37℃孵育结束后,600g 4℃离心3~4分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
再用适量JC-1染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
注意:对于贴壁细胞,如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测,可以先收集细胞,重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
对于六孔板的一个孔,吸除培养液,根据具体实验如有必要可以用PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次,加入1mL细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
加入1mL JC-1染色工作液,充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育20分钟。
在孵育期间,按照每1mL JC-1染色缓冲液(5×)加入4mL蒸馏水的比例,配制适量的JC-1染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
37℃孵育结束后, 吸除上清,用JC-1染色缓冲液(1×)洗涤2次。
把配制好的JC-1染色工作液再用JC-1染色缓冲液(1×)稀释5倍。
0.9mL 5倍稀释的JC-1染色工作液中加入0.1mL总蛋白量为10~100μg纯化的线粒体。
1. JC-1(200×)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20~25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
3. 装载完JC-1后用JC-1染色缓冲液(1×)洗涤时,使JC-1染色缓冲液(1×)保持4℃左右,此时的洗涤效果较好。
4. JC-1探针装载完并洗涤后尽量在30分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。
5. 请勿把JC-1染色缓冲液(5×)全部配制成JC-1染色缓冲液(1×),本试剂盒使用过程中需直接使用JC-1染色缓冲液(5×)。
6. 如果发现JC-1染色缓冲液(5×)中有沉淀,必须全部溶解后才能使用,为促进溶解可以在37℃加热。
7. CCCP为线粒体电子传递链抑制剂,有毒,请注意小心防护。
8. 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅!
9. 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作,同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!
产品参数
| Name | 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1) | ||
|---|---|---|---|
| CAT# | 22202-100T | CAS# | N/A |
| Storage# | −20°C Sealed & desiccated & Minimized light exposure & Minimized Freezing And Thawing | Shelf Life# | 24 months |
| Ex(nm)# | N/A | Em(nm)# | N/A |
| MW# | N/A | Solvent# | N/A |
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